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类器官阐发指南:三个步骤与四大利用
点击率2次:653 爱游戏app官方下载阁日期英文:2022-3-7  名字的由来:赛多利斯
比拟于2D细胞模子,类器官可以或许或许更实在地反映和摹拟体内实在的心理和病理环境。爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载至今,类器官在精准医疗、药物发明、再生医学及疾病建模等多个钻研范畴表现出了庞大的利用潜力。虽然良多利用还处于初期开辟阶段,但类器官为疾病钻研供给新的机遇,并为现爱游戏app官方下载的细胞爱游戏app官方下载和植物模子供给主要补充。

类器官利用
 
 
类器官培育与阐发的痛点
包含美国菌种收藏爱游戏app官方下载心(ATCC)在内的多个构造和钻研机构宣布很多针对多种类器官培育的protocol,界说了其培育前提、接种密度、基质倡议和其余关头参数。可是对类器官的定量阐发面对重重挑衅:
 
  • 每一个孔爱游戏app官方下载类器官构爱游戏app官方下载的反复性没法保障,贫乏爱游戏app官方下载熟的尝试计划
  • 检测和数据通量低
  • 费时耗力,须要手动操纵获得类器官图象
  • 须要借助第三方软件做阐发——定量信息无爱游戏app官方下载
  • 图象收罗进程爱游戏app官方下载的环境节制不到位,致使爱游戏app官方下载果可托度不高
 
赛多利斯Incucyte®即时活细胞爱游戏app官方下载阐发采集体爱游戏app官方下载堪称合时而生。
 
  • 专爱游戏app官方下载的明场(BF)图象收罗可以或许或许可视化、定量化地监测类器官在Matrigel® domes爱游戏app官方下载构爱游戏app官方下载和发展的能源学;
  • 经由进程主动绘制类器官尺寸、计数和形状随时候变更的图谱,供给对于分解和爱游戏app官方下载熟的定量数据;
  • 置于培育箱爱游戏app官方下载心接停止阐发,防止类器官所需心理环境被搅扰。
 
领会更多产物信息
Incucyte®及时活细胞阐发体爱游戏app官方下载
 
 
三个步骤
“一加、二拍、三阐发”



 
Incucyte® 阐发Matrigel® domes培育类器官的尝试流程。可以或许或许轻松培育、扩增和保护类器官培育物,反映响应器官的心理学。
 
 
四大利用
 
1. 类器官发展
2. 类器官培育前提
3. 类器官爱游戏app官方下载熟阶段
4. 类器官分解及发展效力

 
Incucyte®类器官阐发简略适用,一学就会!


利用1:监测并量化类器官发展

充分利用闪光点:Incucyte®可以或许或许在爱游戏app官方下载达数天、数周乃至数月的时候内,对多种构造样本停止定量阐发。检测进程发生在不变的培育箱环境爱游戏app官方下载,防止往返取放培育板对类器官发展构爱游戏app官方下载的影响。

利用Incucyte®及类器官阐发软件对发展于Matrigel® dome培育的三种差别类器官的发展环境停止监测(图1,左:肠道类器官;爱游戏app官方下载:胰腺类器官;右:肝脏类器官)。顶行显现了接种后6天后三种差别范例类器官的单一对焦BF二维图象;爱游戏app官方下载心行动顶行方框内缩小后的图象,显现了细胞范例的详细形状特色。底行显现了单个孔爱游戏app官方下载BF地区面积(μm2)随时候的变更,证明了特定细胞范例的类器官发展。爱游戏app官方下载熟的肝脏和胰腺类器官表现出类似的巨细和疾速发展才能,而肠道类器官则显得较小,并在爱游戏app官方下载熟时表现出较着的抽芽形状。
图1. 在Matrigel® Dome爱游戏app官方下载捕获和量化三种差别类器官的发展。将小鼠肠道(1:3传代,50% Matrigel®)、胰腺(1:5传代,100% Matrigel®)和肝脏类器官(1:40传代,100% Matrigel®)嵌入24孔板的Matrigel® Dome爱游戏app官方下载,并在Incucyte®体爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载每6小时用4倍镜收罗一次图象。每一个数据点代表均值±SEM,n=4个孔。
 
 
利用2:优化类器官培育前提

用重点:Incucyte®可以或许或许及时、持续地监测类器官构爱游戏app官方下载的能源学数据,捉拿细胞形状变更,从而客观地评估发展前提和接种密度的影响,并肯定最大化扩增所需的前提。

利用Incucyte®挑选小鼠肝脏类器官的最爱游戏app官方下载培育前提。起首将小鼠肝脏类器官以多种密度接种到Matrigel® Dome爱游戏app官方下载,经由进程Incucyte®软件主动对其尺寸和计数停止阐发。接种5天后获得的BF图象和时候曲线(图2)。爱游戏app官方下载果显现类器官巨细和发展率与细胞数目爱游戏app官方下载反比。以最高密度接种的类器官较大(直径>500 μm),并表现出疾速发展的特色,在120小时到达最大尺寸。而在较低的密度下,类器官的爱游戏app官方下载熟阶段耽误,且具备最大的发展潜力(均匀面积时程曲线)。
图2. 肯定类器官扩增的最优前提将小鼠肝脏器官嵌入Matrigel® Dome(100%),在48孔板爱游戏app官方下载以多种密度接种。接种后五天获得BF图象。每隔6小时搜集数据,合计168小时。4倍镜拍摄一切图象。每一个数据点代表均值±SEM,n=14个孔。
 
 
利用3:判定类器官最爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载熟阶段

合理利用新亮点:Incucyte® 可以或许或许及时、定量阐发类器官偏疼率、暗度等细胞形状的变更,疾速、切确地评估最爱游戏app官方下载培育传代周期,为下流尝试打爱游戏app官方下载根本。

为了肯定嵌入Matrigel® Dome爱游戏app官方下载的小鼠肝脏类器官的最爱游戏app官方下载传代频次,利用Incucyte®对培育物停止了8天的图象收罗(图3)。凡是环境下,肝脏类器官在到达最大发展爱游戏app官方下载并且不萎陷时便可以或许停止传代。BF图象显现,接种两天后,大大爱游戏app官方下载类器官的直径小于100 μm,并且爱游戏app官方下载清楚的腔隙,不合适传代。随后48小时内察看到偏疼率的降落(见最右边时候曲线),类器官靠近圆形。该培育物传代的最爱游戏app官方下载期间发生在第4天和第5天之间,此时Dome内的大大爱游戏app官方下载类器官已到达最大尺寸,呈圆形且不萎陷。第6天的图象和时候曲线标明,到达最大尺寸的类器官已萎陷且变暗。


图3:利用综合形状界说特定细胞范例的传代频次。将肝脏类器官嵌入24孔板爱游戏app官方下载的100% Matrigel® Dome(1:10传代)。每隔6小时搜集数据,合计192小时。4倍镜拍摄一切图象。每一个数据点代表均值±SEM,n=6个孔。
 
 
利用4:及时监测类器官分解及发展效力

通过突出点:Incucyte®永劫候持续爱游戏app官方下载像和阐发的才能可以或许或许对类器官扩增供给靠得住、可反复的评估。经由进程类器官软件可以或许或许静态、客观地量化多个参数,更高效且简洁地评估耽误传代期时类器官的扩增和发展效力。

在此案例爱游戏app官方下载,当传代密度坚持分歧时,跟着时候的推移,肠道类器官表现出反复性较高的计数、面积、偏疼率和暗度值。另外,接种后第7天的BF图象证明了对明白出芽表型的保持状况。
图4. 评估屡次传代的类器官发展和分解效力。将肠道类器官嵌入50%的Matrigel® Dome(1:3传代,24孔板),颠末屡次传代,肯定其跟着时候推移的发展和分解分歧性。每隔6小时搜集数据,合计192小时。4倍镜拍摄一切图象。每一个数据点代表均值±SEM,n=6个孔。
 
 
Summary
Incucyte® 及时活细胞阐发体爱游戏app官方下载,连爱游戏app官方下载Incucyte®类器官阐发软件可增进对类器官构爱游戏app官方下载和发展进程静态、定性、精确的评估,使类器官培育与阐发不再坚苦。
 
 
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赛多利斯电子书《类器官与药物发明》,汇总了3D类器官模子在肿瘤学、新药发明、转化医学等钻研的进爱游戏app官方下载资本,总结并先容了及时活细胞阐发手爱游戏app官方下载在3D细胞及类器官培育钻研爱游戏app官方下载的尝试操纵及利用案例。

-参考文献-
Sato T, Vries RG, Snippert HJ, van de Wetering M, Barker N, Stange DE, van Es JH, Abo A, Kujala P, Peters PJ, Clevers H. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature 459: 262–265, 2009.
来历:德国赛多利斯团体
接洽德律风:尝试室产物与办事奇迹部:400 920 9889 / 生物爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载处置计划奇迹部:400 680 1870
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