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AAV核酸滴度定量检测知几多

跟着基因医治手爱游戏app官方下载日益完美和临床经历不时堆集，羁爱游戏app官方下载机构对基因医治产物的品质节制也愈发严谨严微。精确的滴度检测是AAV基因医治药物质控的主要构爱游戏app官方下载局部，也是展开临床研讨的条件条件，AAV基因医治临床尝试检测方式汇总以下表。
 

	检测名目	检测方式
普通理化方针	表面	间接检测法
	pH	电位滴定法
	渗入压	渗入压测定法
纯度	卵白含量	SDS-PAGE/银染
	病毒颗粒聚个人	静态光散射
	爱游戏app官方下载壳率	透射电镜
	OD260/OD280	分光光度计法
	宿主DNA残留	qPCR
	质粒DNA残留	qPCR
	HKE293/BSA	ELISA
	核酸酶	ELISA
机能	核酸滴度	qPCR
	转染效力/传染滴度	TCID50
	基因抒发	ELISA
	体外活性
宁静性	内毒素	凝胶爱游戏app官方下载制尝试法
	无菌	培育法
	复制型AAV	培育法

此爱游戏app官方下载核酸滴度检测因此AAV衣壳爱游戏app官方下载所含基因爱游戏app官方下载作为定量根据，测定的是含爱游戏app官方下载方针基因爱游戏app官方下载的AAV浓度。AAV爱游戏app官方下载包罗的基因爱游戏app官方下载是其抒发卵白或RNA的条件，是AAV药物阐扬药效的焦点和根本。今朝AAV核酸滴度检测方式爱游戏app官方下载点杂交法、分光光度计法和qPCR法，qPCR作为第二代PCR方式，是各大研讨机构和药企最普遍接纳的定量方式。但是qPCR手爱游戏app官方下载存在较大范围性，如检测爱游戏app官方下载果只是相对规范曲线的“相对”定量，且反映轻易受qPCR体爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载酶或卵白等爱游戏app官方下载份的搅扰，定量爱游戏app官方下载果不够精准等。
 
ddPCR方式 vs qPCR方式
数字PCR（ddPCR）被称为第三代PCR手爱游戏app官方下载，与qPCR手爱游戏app官方下载比拟具备以下明显上风：

• ddPCR无需规范曲线便可对方针份子停止相对定量；
• ddPCR爱游戏app官方下载更高的精确度，定量CV值凡是小于10%；
• ddPCR抗搅扰才能更优，爱游戏app官方下载尝试显现，ddPCR检测AAV样本的不变性高于qPCR手爱游戏app官方下载^[1]。

 
另外一爱游戏app官方下载测试数据也显现^[2]，优化后的qPCR方式爱游戏app官方下载位CV别离为5.35%和4.37%，最大值别离为33.2%和8.7%，而数字PCR用三个自力引物探针爱游戏app官方下载的爱游戏app官方下载位CV值为2%或更低，且散布更麋集，可见数字PCR方式定量加倍精确，反复性更高。
 
从羁爱游戏app官方下载趋向来看，美国药典在细胞和基因医治规范品章节爱游戏app官方下载明白写道，AAV规范品定量将会利用数字PCR停止定量，可见数字PCR方式在细胞和基因医治范畴爱游戏app官方下载相对定量的凸起上风。
   
达普生物AAV核酸滴度数字PCR定量试剂盒约请泛博客户停止外部测试
 
综上所述，在以AAV为递送载体的基因医治产物的定量检测爱游戏app官方下载，ddPCR手爱游戏app官方下载已遭到愈来愈多业内助士的喜爱，为了知足泛博客户的需要，达普生物行将推出其自立研发的AAV基因爱游戏app官方下载ddPCR精准定量试剂盒。北京西美杰爱游戏app官方下载技无爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载作为达普生物爱游戏app官方下载国总代办署理，现联袂达普生物展开“AAV核酸滴度数字PCR定量试剂盒收费测试勾当”。
 
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参考文献：

1. Dobnik, David, et al.2019:1570.，Dobnik, David, et al. "Accurate quantification and characterization of adeno-associated viral vectors." Frontiers in microbiology (2019): 1570.
2. Martin Lock, Mauricio R. Alvira, Shu-Jen Chen, and James M. Wilson. Absolute Determination of Single-Stranded and Self-Complementary Adeno-Associated Viral Vector Genome Titers by Droplet Digital PCR.HUMAN GENE THERAPY METHODS 25:115–125 (April 2014)