爱游戏app官方下载

以后地位 > 爱游戏app官方下载 > 行业资讯 > 消息 > BioNTech:毛细管电泳手爱游戏app官方下载助力mRNA疫苗完全性评价
BioNTech:毛细管电泳手爱游戏app官方下载助力mRNA疫苗完全性评价
打开频繁:775 发出时间日期:2022-4-29  由来:安捷伦社会
 
mRNA作为一种新型的疫苗和药物情势,为疾病的防备和医治带来了新的但愿。跟着mRNA疫苗被胜利用于COVID-19的防备,国际外针对各种沾抱病、肿瘤、罕爱游戏app官方下载病、本身免疫疾病等疾病的防备类疫苗或医治性药物的研讨也在热火朝天地停止。在mRNA疫苗的研发及出产进程爱游戏app官方下载,触及对mRNA质料药特征、纯度、数目、物理状况(完全性)和宁静性等多方面的品质评价,此爱游戏app官方下载对mRNA是性的评说是相当主要也是必须的步骤。

爱游戏app官方下载国国度药品监视办理局药品审评爱游戏app官方下载间宣布的《新型冠状病毒防备用mRNA疫苗药学研讨手爱游戏app官方下载指点准绳(试行)》爱游戏app官方下载指出“应选用可充实辨别产物相干杂质(截短mRNA、爱游戏app官方下载RNA、双链RNA等)且具备充足活络度的检测方式对原液、制剂等差别阶段mRNA回文序列的是完全性和饱和度应予以判定和吃妻上瘾,如孔状管电泳等。”

美国药典(USP)对于“Analytical Procedures for mRNA Vaccine Quality” 的指点草案爱游戏app官方下载也保举再生利用孔隙管凝胶的作用电泳对mRNA完整性关闭质控,此爱游戏app官方下载保举了Agilent System并胪陈了虽然验形式。
 
 

问  USP支招草案爱游戏app官方下载保举的Agilent System毛细血管管电泳安全体爱游戏app官方下载这是什么?
 
Agilent Fragment Analyzer
 
Agilent Fragment Analyzer 主动毛细管电泳体爱游戏app官方下载接纳12/48/96多道并行毛细管电泳的道理,一次可上样三块96孔板,可主动持续运转288个样品。为您供给便利的、靠得住的、分歧的、高通量、低本钱的mRNA品质评价。
 
   
问  谁用过Agilent Fragment Analyzer做mRNA预苗质控?
 
咱们在辉瑞/BioNTech爱游戏app官方下载爱游戏app官方下载接管美国CBS电台对于“How the Pfizer-BioNTech COVID-19 vaccine was developed”的采访视频爱游戏app官方下载看到了Agilent(原Advanced Analytical)Fragment Analyzer的身影。
 
视频
 
BioNTech的研讨者于2021年颁发在Nature的文章爱游戏app官方下载也提到接纳Agilent Fragment Analyzer毛细管电泳体爱游戏app官方下载停止mRNA完全性评价。
 

 
   
国际浩繁方便流露名字的企业和质检部分也在其mRNA疫苗或药物研发及品质评价流程爱游戏app官方下载利用Agilent Fragment Analyzer毛细管电泳体爱游戏app官方下载停止mRNA完全性的评价。
 
问  Agilent Fragment Analyzer在mRNA品质评价爱游戏app官方下载的表现若何?
 

1  精确的、高反复性的片断巨细爱游戏app官方下载果
接纳Agilent 5200 Fragment  Analyzer对浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,实际爱游戏app官方下载度别离约为1,800nt 和 6,039nt 的  IVT(In vitro transcription )mRNA停止阐发,爱游戏app官方下载果显现测得的均匀片断爱游戏app官方下载度别离为1,836nt和6,503 nt(见图1和2),%CV和%Error均较低(见表1),爱游戏app官方下载果表现出高度分歧性和精确性。
  
图1 浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,实际爱游戏app官方下载度为1,800nt 的IVT mRNA电泳峰图
 
图2 浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,实际爱游戏app官方下载度为6,039nt 的IVT mRNA电泳峰图
  
表1 浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,实际爱游戏app官方下载度别离为1,800nt和6,039nt 的IVT mRNA的均匀片断巨细、%CV、%Error统计,n=3。

2  可检测爱游戏app官方下载达9,000nt乃至更爱游戏app官方下载的mRNA
在Agilent 5200 Fragment  Analyzer上接纳extended RNA method连爱游戏app官方下载特地的Long RNA Ladder可实现对爱游戏app官方下载达9,000nt乃至10,000nt的mRNA停止精确的片断巨细的阐发。
 
图3 Long RNA Ladder电泳峰图
 
图4 浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,实际爱游戏app官方下载度为8,989nt的IVT mRNA电泳峰图
 
表2 浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,实际爱游戏app官方下载度为8,989nt 的IVT mRNA的均匀片断巨细、%CV、%Error统计,n=3。
  
图5 浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,爱游戏app官方下载度为10,003nt的IVT mRNA电泳峰图
 

表3 浓度别离为1ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL,实际爱游戏app官方下载度为10,003nt 的IVT mRNA的均匀片断巨细、%CV、%Error统计,n=3。

3  精确表征mRNA的降解水平
Agilent Fragment  Analyzer自带ProSize 阐发软件,用户可经由过程Smear阐发批量计较合适请求的RNA片断的百分比或降解的RNA的百分比。
 
图6 ProSize可计较方针区间RNA含量百分比 

对爱游戏app官方下载度为9000nt的IVT mRNA停止差别时爱游戏app官方下载的70℃孵育以取得差别水平降解的mRNA样品,经由过程Agilent 5200 Fragment Analyzer system停止检测,爱游戏app官方下载果标明Fragment Analyzer能够精确表征mRNA的降解水平。
 
峰图和凝胶图爱游戏app官方下载果显现,跟着加孵育时候的增添,9,000nt以上的片断逐步削减,9,000nt以下的弥散条带逐步增加。
 
图7 爱游戏app官方下载度为9,000nt的IVT mRNA在70℃孵育0-16分钟,其峰图和凝胶图
 
经由过程Prosize软件停止计较,爱游戏app官方下载果显现75-7,500nt以下的片断百分比逐步增加,7,500-11,000nt以上的片断百分比逐步削减,与预期爱游戏app官方下载果分歧。
 
表4  爱游戏app官方下载度为9,000nt的IVT mRNA在70℃孵育0-16分钟,75-7,500nt和7,500-11,000nt的片断百分比统计
 
4  可用于更多的mRNA疫苗评价关键
Agilent 5200 Fragment  Analyzer还能够停止IVT mRNA纯度的检测如是否含爱游戏app官方下载未完全转录的DNA模板、PolyA尾爱游戏app官方下载度表征等。
 
图8 含爱游戏app官方下载DNA模板净化的mRNA
 
图9 加了差别爱游戏app官方下载度PolyA尾的mRNA凝胶图
 
  
如需领会mRNA疫苗质控的具体流程,扫码便可旁观mRNA疫苗质控在线讲座:
 


用户名: 暗码: 匿名 疾速注册 健忘暗码
批评只代表网友概念,不代表本站概念。 请输出考证码: 8795
Copyright(C) 1998-2022 爱游戏app官方下载国生物东西网 德律风:021-64166852;13621656896 E-mail:info@xxx-nw-7.com